MammaTyper RT-qPCR與IHC檢測ER/PR/Ki67/HER2-low之間顯示出高度一致性。
目前，儘管多基因檢測技術在乳腺癌的診斷和治療中扮演著越來越重要的角色，但對於這些多基因測試與免疫組織化學（IHC）結果之間相關性的資料仍然相對有限。而深入探索多基因檢測結果與IHC結果之間的一致性，對於提高乳腺癌的診斷準確性、最佳化治療方案以及改善患者預後具有重要意義。
近期，一項研究致力於評估MammaTyper RT-qPCR與IHC檢測在乳腺癌粗針穿刺活檢樣本中，對雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、增殖細胞核抗原（Ki67）及人2（HER2）表達的一致性。研究結果顯示，MammaTyper檢測結果與IHC檢測結果呈現出高度一致性，支援了MammaTyper可作為一項可靠且有效的工具，應用於乳腺癌的分類以及HER2低表達腫瘤的識別。這一發現對於病理學家在臨床實踐中作出精確的乳腺癌診療決策，具有重要意義。
研究方法
研究收集了2018至2019年間在伯明翰伊麗莎白女王醫院的133個乳腺癌粗針穿刺活檢的甲醛固定石蠟包埋（FFPE）樣本。樣本中侵襲性的含量至少為20%，由乳腺病理學家確定。樣本的ER、PR、Ki67和HER2狀態透過IHC進行評估。使用DAKO Omnis自動染色平臺進行ER、PR和Ki67染色，HER2 IHC則使用Ventana BenchMark Ultra平臺。Ki67免疫染色切片使用Leica Aperio AT2掃描器進行掃描，並由病理學家進行評分，同時使用基於深度學習的Ki67評估應用程式（Visiopharm, Denmark）進行數字影象分析。從FFPE樣本中提取和純化RNA，然後使用MammaTyper試劑盒在CFX96 qPCR迴圈儀上評估ESR1、PGR、ERBB2和MKI67基因的mRNA表達。
計算連續變數的中位數、最小值和最大值，並將分類變量表示為絕對和相對頻率。使用正百分比一致性（PPA）、負百分比一致性（NPA）和總體百分比一致性（OPA）以及Cohens kappa統計量來評估MammaTyper RT-qPCR與IHC檢測方法在ER、PR、HER2和Ki67表達判讀上的一致性。特別關注HER2低表達腫瘤的分類，並分析Ki67的全域性和熱點表達。
圖1.研究設計流程圖
研究結果
臨床病理學特徵
本研究共納入了2018至2019年間在單一英國機構（伯明翰伊麗莎白女王醫院）診斷的133個乳腺癌粗針穿刺活檢樣本。患者的中位年齡為61歲（範圍：26-92歲），60.3%的腫瘤組織學分級為2級。所有粗針穿刺活檢樣本均進行了MammaTyper檢測。一個包含實體乳頭狀癌的腫瘤被排除在IHC染色路徑之外。
MammaTyper與IHC之間ER、PR、HER2檢測的一致性
透過IHC和MammaTyper RT-qPCR檢測的ER、PR、Ki67和HER2的截斷值已預先分類（例如陽性或陰性）。所有標記的OPA（95% CI）均高於90%；ER為94.7%（89.5%-97.4%），PR為90.1%（83.9%-94.1%），HER2為95.0%（90.0%-97.8%）。
MammaTyper與IHC之間PR檢測的一致性
使用1%、10%和20%的截斷值，PR/PGR的OPAs超過90%。
MammaTyper與IHC之間HER2檢測的一致性
OPA達到95.0%，而PPA相對較低，為84.6%。Kappa值顯示為0.759，表明存在實質性的一致性。在126個癌症樣本中，有13個（佔比10.3%）透過IHC/FISH檢測被判讀為HER2陽性，而透過MammaTyper檢測判讀為HER2陽性的樣本數量為15個（佔比11.9%）。
HER2-low乳腺癌
HER2-low定義為IHC得分為1+或2+且FISH結果為陰性的腫瘤。在113個HER2 IHC陰性腫瘤中，72個（63.7%）為HER2 0，41個（36.3%）為HER2-low。後者透過MammaTyper檢測被分類為35個HER2-low，3個HER2陰性和3個陽性類別。總的來說，72個IHC HER2 0腫瘤透過MammaTyper檢測被分類為40個HER2-low，31個HER2 0和1個陽性類別（圖2）。因此，72個IHC HER2 0腫瘤中有40個透過MammaTyper檢測顯示出ERBB2低表達（圖3）。
圖2. HER2 IHC和ERBB2 mRNA類別的河流圖
圖3. HER2-low分析
ER/PR/HER2 IHC和mRNA表達的分佈
ER和PR IHC表現出兩個高峰；最高的是強陽性表達，其次是陰性（0）染色。然而，mRNA表現出更廣泛的動態範圍表達。同樣，標準的HER2 IHC得分（0、1+、2+和3+）對應於更廣泛的mRNA水平範圍，表明IHC得分0、1+和2+可以使用MammaTyper檢測進一步分類。
MammaTyper與IHC之間Ki67表達的一致性
Ki67 IHC資料在一個子佇列（n=47）中，透過手動及數字分析方式得以獲取，鑑於在英國並非所有乳腺癌病例均常規開展此項檢測。依據20%的截斷值標準，經由標準病理學家的大致評估，MammaTyper所得MKI67與Ki67 IHC的PPA為92.3%，NPA為61.9%。然而，當採用Ki67的熱點分析（即數字影象分析）方法時，NPA提升至80.0%，而PPA則略有降低。
研究總結與思考
本研究透過前瞻性研究方法，評估了MammaTyper RT-qPCR與IHC檢測在乳腺癌生物標誌物（ER、PR、HER2、Ki67）表達評估中的一致性。結果顯示，RT-qPCR與IHC在ER、PR和HER2的表達評估上具有高度一致性，其中ER的一致性高達94.7%，PR為90.1%，HER2為95%。特別地，對於HER2低表達的腫瘤，MammaTyper能夠識別出更多HER2低表達病例，這可能對治療決策產生重要影響。此外，MKI67的評估在採用數字影象分析時與IHC顯示出更高的一致性。
研究還發現，mRNA表達水平與蛋白水平高度一致，且一致性率高於以往研究。這一發現對於HER2低表達乳腺癌的治療尤為重要，因為最新的靶向療法可能對這部分患者有效。例如，德曲妥珠單抗（T-DXd）在HER2低表達轉移性乳腺癌患者中顯示出相比化療更優的生存獲益。因此，MammaTyper可能成為選擇適合抗HER2靶向治療患者的更可靠工具。
此外，研究還強調了Ki67表達在ER陽性乳腺癌預後中的重要性，並指出IHC評估與基因組檢測資料之間存在顯著差異。這提示我們，基於mRNA的檢測方法可能有助於完善乳腺癌的分子分類和靶向治療選擇。
綜上所述，本研究提供了MammaTyper作為IHC在乳腺癌生物標誌物評估中可靠替代方法的有力證據，並揭示了其在HER2低表達乳腺癌分類和治療中的潛在應用價值[2]。這些發現對於病理學實踐和乳腺癌患者的個體化治療具有重要意義。
參考文獻：
[1]Badr NM, Zaakouk M, Zhang Q, et al. Concordance between ER, PR, Ki67, and HER2-low expression in breast cancer by MammaTyper RT-qPCR and immunohistochemistry: implications for the practising pathologist. Histopathology. 2024 Sep;85(3):437-450.
[2]Modi S, Jacot W, Yamashita T, et al. Trastuzumab Deruxtecan in Previously Treated HER2-Low Advanced Breast Cancer. N Engl J Med. 2022 Jul 7;387(1):9-20.
審批編號：CN-147517有效期至：2025-11-18
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